氨基酸
氨基酸作为构成人体的蛋白质的基本单元,同时也是生物机体所需要的重要营养素。它们在机体内具有各自*的营养功能,在代谢过程中又密切,共同参加、推动和调节生命活动。氨基酸分子中含有氨基和羧基及其他取代基团,因此氨基酸分子为极性水溶性分子,在反相色谱柱上保留较弱,无法直接进行分析。
常用的分析方法有离子交换分离后直接或间接分析,但操作复杂,部分氨基酸无法分离导致结果准确度差,或者将氨基酸衍生后采用反相色谱法分离与紫外或荧光联合分析,方法简单,但检测灵敏度受衍生过程控制,且样品基质对分离效果影响较大。
石墨化碳柱(PGC)为新型的色谱柱填料,由于其具有特异的保留机理,可用于分离在反相色谱柱上无法保留的极性化合物,如氨基酸、碳水化合物等。本实验采用石墨化碳柱直接分离氨基酸,采用蒸发光散射检测器(ELSD)进行定量分析来测定氨基酸的含量。
色谱条件:
色谱柱:Hypercarb 2.1×100mm,5 μm
(货号:35005-102130)
流动相:A:20mM 九氟戊酸(NFPA)(水溶液);B:CAN
流速:0.2mL/min
检测器:ELSD(55℃,2.2Bar)
柱温:10℃
结论
采用石墨化碳黑(PGC)色谱柱和ELSD检测器无需衍生化操作即可直接分析22种氨基酸。
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