复方盐酸阿替卡因注射液的分析

肾上腺素的分析

CAPCELL PAK C18 MGII

复方盐酸阿替卡因注射液为复方制剂，是盐酸阿替卡因与肾上腺素的灭菌水溶液，作为口腔用局部麻醉剂，适用于涉及切骨术及粘膜切开的外科手术过程。

盐酸阿替卡因

Articaine hydrochloride

M.W. : 320.84

肾上腺素

L(-)-Epinephrine

M.W. : 183.2  

客户提供了复方盐酸阿替卡因注射液，盐酸阿替卡因、肾上腺素及亚硫酸肾上腺素对照品，希望本实验室选择合适的色谱柱及色谱条件，对注射液中盐酸阿替卡因和肾上腺素进行分析。

国家药品标准（YBH17082004-2015）中，在对复方盐酸阿替卡因注射液中肾上腺素进行分析时，使用甲醇-水进行梯度洗脱，但由于肾上腺素极性较强，即使初始梯度为纯水相条件，肾上腺素仍紧邻死时间出峰，保留不佳，易受到溶剂峰干扰，无法进行准确定量。

本实验室尝试使用能够在纯水条件下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ柱，和键合金刚烷基的高表面极性色谱柱CAPCELL PAK ADME分别进行分析，均无法得到理想的保留。

进而，我们分别尝试使用反相C18柱加离子对试剂，以及直接使用离子交换色谱柱两种方式，分别对肾上腺素进行保留分析。

首先，仍然使用盐酸阿替卡因分析中应用到的CAPCELL PAK家族“选择”——中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII，并在流动相中添加离子对试剂对肾上腺素进行分析。

如图1，对肾上腺素对照品溶液进行分析，肾上腺素主峰保留时间为5.69 min，拖尾因子为1.19，理论塔板数为12538。

在相同色谱条件下，尝试对亚硫酸肾上腺素标准品及注射液中的亚硫酸肾上腺素进行分析。

如图3，注射液中未明显见亚硫酸肾上腺素出峰，亚硫酸肾上腺素标准品溶液能够得到良好分析结果，保留时间为3.55min，拖尾因子为1.14，理论塔板数为14955。

考虑到使用离子对试剂的流动相条件具有流动相配制麻烦、有损色谱柱寿命、平衡时间长等缺点，我们也尝试使用键合磺酸基团的强阳离子交换柱——CAPCELL PAK SCX进行分析，在流动相中添加磷酸二氢铵，通过对盐浓度进行调整，终，如图4，在5 mmol/L磷酸二氢铵（磷酸调pH=2.5）条件下，亚硫酸肾上腺素保留时间为3.32 min，然而出现峰形拖尾现象，拖尾因子为2.0，不如CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱添加离子对试剂所得分析结果好。

综上实验结果，使用中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII S5 4.6 mm i.d. × 250 mm，在流动相中添加5 mM辛烷磺酸钠、30°C柱温条件下进行梯度洗脱，能够实现复方盐酸阿替卡因注射液中肾上腺素和亚硫酸肾上腺素的良好保留与分析。