梯度方法开发攻略之梯度条件的影响因素
更新时间：2019-10-10 点击次数：2762次
今天，将为您带来梯度方法开发攻略②：梯度条件的影响因素，共同探讨在梯度条件下需要注意哪些因素。
1. 不同色谱柱的分离选择性
2. 梯度斜率
3. 初始有机相比例
4. 梯度拐点设置
5. 流动相或柱温优化
不同色谱柱的分离选择性
不同色谱柱的疏水性、表面极性存在差异，因此化合物的出峰时间也会受到影响，我们可以根据化合物的特性选择合适的色谱柱。
梯度斜率
梯度斜率 N =Δ B% / tGra （% / min）
梯度斜率越大，洗脱速度越快，但分离度同时下降。
初始有机相比例
初始比例 Binitial %，通常对于早出峰的化合物保留分离影响大。
梯度拐点设置
合理设置梯度拐点，可以有效地缩短分析时间。
流动相或柱温优化
温度从35℃升高到45℃，增强了化合物的分离度。
调整流动相比例，可以有效缩短分离时间。
通过更换色谱柱柱长、粒径、流速、来获得快速分析结果。
梯度分析中需要注意的几个问题
1）梯度条件需要进行充分洗脱；
2）梯度进行完毕需要重新平衡回初始状态，才能进行下一个梯度序列的分析；
3）梯度条件会造成基线漂移，需要进空白样确定梯度基线变化；
4）注意观察压力变化情况；
5）当流动相中含有缓冲盐时，在梯度有机相高点不得盐析。
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