近年来，抗病毒的yao物在动物上的滥用现象频繁发生，可直接导致病毒耐药性的产生，严重影响药物对人的治疗作用，对人类健康构成了潜在威胁。
因此，我国农业部明令禁止动物使用利巴韦林等抗病毒yao物，并且出台了动物源食品中抗病毒yao物的检测标准，切实保障动物源食品的安全。
大曹技术中心参考《出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》（SN/T 4519-2016）标准，在LC-MS上建立了利巴韦林标准品的检测方法。
SN/T 4519-2016 规定了色谱柱类型
那么问题来了？
什么是两性离子型亲水相互作用色谱柱？
跟一般的亲水色谱柱有什么区别呢？
利巴韦林检测为什么使用这款色谱柱？
01
两性离子型亲水相互作用色谱柱
两性离子型亲水相互作用色谱柱，是固定相键合了两性离子的亲水型色谱柱。
然而，目前市面上大多数的亲水性色谱柱（HILIC），通常键合的中性或者非两性的带电基团，对极性化合物保留能力不够，或容易产生静电力吸附导致拖尾。
大阪曹達独立研发的两性离子型亲水色谱柱——PC HILIC，键合为PC（磷酸胆碱）基团，它是构成细胞膜的成分，拥有高亲水性和生体适应性。
PC HILIC 键合相结构
PC两性离子键合相的优势：
1、形成稳定的“富水层”，对极性物质保留能力更好；
2、两性离子型键合相对化合物额外的静电力吸附少，峰形更加尖锐；
3、低浓度的缓冲盐调节，即可实现分离效果的提升。
好了，话不多说，咱们来看看利巴韦林的检测方法吧。如果您想了解更多PC HILIC & CAPCELL CORE PC的内容，请直接阅读文末内容。
02
SN/T 4519-2016利巴韦林的分析方法
首先，使用核壳型高柱效两性离子键合亲水性相互作用色谱柱CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×150mm，在5 mmol/L乙酸铵（0.2%甲酸）-乙腈条件下进行分析，结果如图1所示，利巴韦林在HILIC模式下，能够获得良好保留与良好峰形，出峰时间为3.57min，总分析时间9.5min。
图1 SN/T条件下LC-MS分析结果
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×150mm
流动相：A:5mmol/L乙酸铵（0.2%甲酸） B:乙腈
B% 95%(0min) ->95%(2min) ->70%(4min) ->40%(5min) ->95%(6min) ->95%(10min)
流 速：0.4mL/min
温 度：30°C
检 测：Qtrap 5500; ESI; Positive; MRM
进样量：2 µL
浓 度：2 ng/mL（水溶后使用初始比例流动相稀释）
03
利巴韦林的LC-MS快速分析方法
由于CAPCELL CORE PC色谱柱能够对利巴韦林得到良好保留结果，也可以使用更短色谱柱以获得更快速的分析结果。我们重新优化梯度后，得到结果如图2所示，出峰时间缩短为0.83min，由于HILIC型色谱柱相对平衡较慢，因此设置2min后平衡时间，总体分析时间缩短为4min。
图2 利巴韦林LC-MS快速分析结果
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×50mm
流动相：A:5mmol/L乙酸铵（0.2%甲酸） B:乙腈
B% 95%(0min) ->95%(0.5min) ->50%(2min) ->95%(2.1min) ->95%(4min)
流 速：0.5mL/min
温 度：30°C
检 测：Qtrap 5500; ESI; Positive; MRM
进样量：2 µL
浓 度：2 ng/mL（水溶后使用初始比例流动相稀释
综上所述，使用CAPCELL CORE PC S2.7（两性离子亲水性相互作用）色谱柱能够完成《出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》（SN/T 4519-2016）中利巴韦林的良好保留与检测，柱长可根据实际分析需要进行选择。
PC HILIC & CAPCELL CORE PC
PC HILIC是在硅胶基材表面以PC基团进行修饰，实现了适用于HILIC色谱柱的超亲水性填料的制造。与普通硅胶色谱柱相比，PC HILIC的亲水性更强，对极性化合物核酸碱基的保留更强。
PC HILIC色谱柱 VS 其他公司HILIC色谱柱：在酸性条件下对极性化合物核酸碱基进行分析，因 PC HILIC 具有*亲水性，对核酸碱基得到了良好保留，有利于分离。另外，理论塔板数也很高，峰形也很尖锐。
色谱柱：PC HILIC S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm
流动相：10 mmol/L HCOONH4 (pH 3.5) / CH3CN = 10 / 90
流 速：1.0 mL/min
温 度：40℃
检 测：UV 254 nm
样 品：①萘 ②胸腺嘧啶 ③腺嘌呤 ④胞核嘧啶
CAPCELL CORE PC VS PC HILIC：出峰更快，具有核-壳型色谱柱柱效高的特点。
【液相条件】
流动相：10 mmol/L甲酸铵 / 乙腈 = 10 / 90
流 速：400 μL/min
温 度：40℃
检测器：UV 254 nm
进样量：1 μL
样 品：1. 胸腺嘧啶(5 ppm) 2. 尿嘧啶(5 ppm) 3. 腺嘌呤(5 ppm) 4. 胞嘧啶(5 ppm) 5. 鸟嘌呤(5 ppm)
因此，CAPCELL CORE PC S2.7是分析强亲水性化合物的核-壳型HILIC色谱柱。
