如果是遇到堵塞的情况,先要确定堵塞是由于什么原因引起的,如果是由于
F92533ac米兰体育官网 中残留的缓冲盐引起的,这是轻微的堵塞了,可以尝试用高比例的水相在较高的温度下冲洗色谱柱。
如果是由于样品原因导致色谱柱堵塞,又要考虑另外的办法,如果是样品中含有太多吸附性很强的物质(有时是复杂样品中的某些杂质,无法通过过滤离心等办法去除)沉积吸附在柱头导致堵塞,可以尝试使用不同的溶剂(对此类物质有较好溶解性的)慢慢冲洗。
如果是由于样品过滤不当或者样品在色谱柱上析出导致某些颗粒杂质堵塞了色谱柱,除了尝试寻找合适溶剂冲洗之外,只能考虑反冲了,通常,不建议反冲色谱柱,因为可能对色谱柱造成较大损害,所以反冲是迫不得已的死马当活马医的办法,一定要慎用。做好样品的前处理并使用预柱或在线过滤器才是保护色谱柱的好办法!
F92533ac米兰体育官网 流动相中缓冲盐的正确使用方法:
1、使用前的处理:在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱,直至基线平稳。原则上,用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由:缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时,如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小,不先冲洗掉,接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时,缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出,沉积下来,这将可能导致上述对色谱柱的损害。
2、使用后的处理:用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相的区别是,用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗,直至基线平稳。如果F92533ac米兰体育官网 在接下来很长的一段时间内不使用,要长期保存,则需再加上一步,即用纯的有机溶剂冲洗一遍,直至基线平稳。